Waarom zout bij DNA isolatie?

We vinden het DNA terug in polaire fase, want DNA bevat ladingen op de fosfaat groepen. Door toevoeging van zout zorgen we ervoor dat de DNAstrengen aan elkaar klitten. Het detergent wordt toegevoegd omdat het de 2lipidelagen van de celmembranen afbreekt. Het detergent vormt dus een complex met de membranen.

In die zeepoplossing zit ook zout. Dit zout is onder andere nodig om de vrijgekomen eiwitten te “complexeren”. Zo kan je het DNA gemakkelijk van de eiwitten scheiden. De celfragmenten verwijder je door filtratie; het DNA blijft dan achter.

Waarom ethanol bij DNA isolatie?

DNA ‘uit oplossing halen’: door een ijskoude alcohol toe te voegen, slaat het DNA uit de oplossing neer. DNA is namelijk minder goed oplosbaar in een alcohol dan in water. Het neergeslagen DNA kan vervolgens verwijderd worden uit de oplossing, bijvoorbeeld door te centrifugeren of door het met een pipet op te zuigen.

Wat is de functie van Chelex bij DNA isolatie?

Chelex is een chelerende hars (bestaat uit hele kleine bolletjes) en bindt polaire celcomponenten nadat de cellen open gebroken zijn. DNA en RNA zijn niet polair (negatief geladen) en blijven in de waterige oplossing boven chelex.

Hoe isoleer je DNA?

Protocollen voor DNA-extractie kunnen doorgaans onderverdeeld worden in 3 stappen:

1. Openbreken van de cel, bijvoorbeeld door sonificatie of lyse.
2. Lipiden, vooral afkomstig van membranen, verwijderen door middel van de toevoeging van een detergens.
3. Neerslaan van het opgeloste DNA, bijvoorbeeld met ethanol of isopropanol.

Waarom gebruiken we in het begin van een extractie afwasmiddel en zout?

Het gebruik van zout helpt met het elimineren van de histonen, eiwitten waar het DNA omheen gewikkeld zit. Het opwarmen naar 60 °C helpt met het afbreken van de membranen. de hogere temperatuur deactiveert ook bepaalde enzymen zoals DNase die ervoor kunnen zorgen dat het DNA degradeert.

Hoe haal je DNA uit een kiwi?

In kiwicellen zit een eiwitsplitsend enzym dat de eiwitten in chromosomen splitst. Hierdoor kun je de DNA-isolatie van een kiwi als een simpele huis-tuin-en-keuken-proef uitvoeren. Met behulp van afwasmiddel, spiritus, zout en water tover jij zo meteen het DNA van een kiwi tevoorschijn!

Wat extractie?

Extractie is een scheidingstechniek waarbij stoffen worden afgezonderd uit een bepaald materiaal en worden overgebracht naar een andere fase. De overgang van de stof vindt plaats door het verschil in affiniteit of chemische potentiaal tussen beide fasen tot er zich een thermodynamisch evenwicht heeft ingesteld.